实验结果： 针对基因A和基因B，分别采用凯发一触即发设计平台和其他设计软件设计siRNA序列，通过qPCR检测对应mRNA水平，实验验证结果表明，凯发一触即发设计的siRNA的基因沉默效率 ( knockdown efficiency, KD% )更高，活性更好。
一站式服务
多元化方案
经验丰富，交付快
| 服务详情 | 长度* | 规格* | 设计类型 | 纯化方式 | 修饰 | 偶联类型 | QC* | 检测方案# |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| siRNA | 19-25nt | 5nmol – kg级别 |
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支持锁核酸( LNA )，硫代，甲基化，2-Ome等200多种修饰 | 抗体，多肽，脂质等 |
|
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| ASO | 10-30nt |
|
注：*其他长度或交付量欢迎详询。
交付产品与报告
| QC项目 | 检测方式 | 检测标准 | 标准QC | 定制化QC |
|---|---|---|---|---|
| 外观 | 目视检查 | 白色或淡黄色粉末 | ||
| 分子量 | MS | 理论分子量偏差±0.1% | ||
| 杂质分析 | LC-MS | 检测报告 | ||
| LC MS/MS测序 | 高分辨率的质谱测序 | 序列覆盖度100% | ||
| 纯度 | HPLC | 双链siRNA：纯度高达90% | ||
| 纯度 | CGE | 检测报告 | ||
| 纯度 | PAGE | 检测报告 | ||
| pH | pH计 | 检测报告 | ||
| TEA Salt残留 | GC-MS | 检测报告 | ||
| 溶剂残留 | GC-MS | 检测报告 | ||
| 内毒素 | 显色法 | 检测报告 | ||
| 生物负载 | 直接培养法 / 膜过滤法 | 检测报告 |
| 疾病类型 / 细胞类型 | 细胞系名称 |
|---|---|
| 膀胱癌 | RT-4 |
| 宫颈癌 | Hela |
| 癌症相关成纤维细胞 | SJCRH30 |
| 白血病 | THP1, Jurkat, SUP-T1, NALM-6 |
| 肝癌 | HepG2, Huh-7, Hep3B |
| 肺癌 | A549, H1975, H358 |
| 神经母细胞瘤 | SH-SY5Y, SK-N-BE(2) |
| 卵巢癌 | RMG-1 |
| 皮肤癌 | A375, A431 |
| 结肠癌 | SW480 |
| 非癌性细胞 | HEK293T, HUVECS |
| 小鼠细胞 | L929S, CHO, Raw264，4T1，B16-F10 |
| 原代细胞 | PBMC，原代食蟹猴肝细胞 |
凯发一触即发同样支持其他定制化的细胞系
实验结果： 针对基因A和基因B，分别采用凯发一触即发设计平台和其他设计软件设计siRNA序列，通过qPCR检测对应mRNA水平，实验验证结果表明，凯发一触即发设计的siRNA的基因沉默效率 ( knockdown efficiency, KD% )更高，活性更好。
实验结果： 高效的定点偶联技术实现siRNA和抗体的偶联（ARC, Antibody RNA Conjugation）不仅可以保证显著的基因沉默效率，还可以实现靶向递送。
表达抗体受体蛋白的细胞可以观察到50%的基因沉默效率 ( 左图 )，不表达抗体受体蛋白的细胞未见基因沉默效率 ( 右图 )。
实验结果：使用LNP包封siRNA，基因沉默效率可高达96%。
实验结果：凯发一触即发设计的siRNA文库中，经过筛选实验可以获得大量优于阳性对照的siRNA序列。本次实验在100+序列中筛选出了20条序列，开展后续优化实验。
针对该20条初筛序列，进行不同位置/不同类型的修饰，用于提升基因沉默效率。优化后的序列，活性大幅提升，IC50仅为阳性对照的1/10。
ELISA
应用：分泌蛋白的定量
优势：支持定性和定量，可使用酶标仪检测
免疫荧光染色
应用：膜蛋白的定量
优势：支持定性和定量，可使用流式细胞仪检测
Western blot
应用：多种蛋白的定量
优势：支持定性和半定量，可使用凝胶电泳检测
RNAi (RNA interference)是由dsRNA介导的，由特定酶参与的特异性基因沉默现象，通过碱基互补识别和抑制靶mRNA，阻断基因的表达，实现对蛋白表达的调控。科学家通过设计靶向某种疾病的致病基因转录的mRNA的小核酸药物，抑制或封闭该致病基因的表达，即可达到治疗疾病的目的。
siRNA ( 小分子干扰RNA，Small interfering RNA )
机理： siRNA与AGO2蛋白等形成基因沉默复合物RISC，RISC具有核酸酶的功能，特异性切割降解靶标mRNA。siRNA还可作为引物与靶RNA结合并在依赖RNA的RNA聚合酶(RdRP)作用下合成更多新的dsRNA，新合成的dsRNA再由核酸内切酶Dicer切割产生大量的次级siRNA，从而使RNAi的作用放大，进一步降解靶mRNA。
特点：
ASO (反义寡核苷酸)
机理：一类是基于RNase H1-介导的mRNA降解机制，ASO通过碱基互补配对原则，与目标RNA相结合，形成RNA/DNA异二聚体，被内源性细胞RNase H识别并降解，从而达到诱导基因沉默，减少蛋白翻译。另一大类是基于ASO结合带来的空间位阻，封闭mRNA关键区域，从而影响mRNA的成熟或者翻译为蛋白。
特点:
| 项目 | 小分子药物 | 抗体药 | 小核酸药 | 基因治疗 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 特点 | 性质 | 小分子化合物 | 蛋白 | RNA | DNA/基因编辑组件 |
| 分子量 | 小（<900 da） | 高（~150 kda） | 中等（13-16 kda） | 中等 | |
| 靶点数量 | ++ | + | ++++ | +++ | |
| 靶点类型 | 蛋白 | 分泌蛋白 / 膜蛋白 | mRNA | DNA | |
| 特异性 | ++ | +++ | ++++ | +++ | |
| 半衰期 | + (~Hours-days) | ++ (~Days-week) | ++++ (~Months) | ++++（数月） | |
| 免疫原性 | 低 | 高 | 低 | 低 | |
| 基因随机插入风险 | 无 | 无 | 无 | 有 | |
| 研发 | 稳定性 | 稳定 | 不稳定 | 不稳定 | 不稳定 |
| 递送 | 简单 | 难 | 难 | 难 | |
| 合成/实验周期 | 数月 | 数月 | 数周 | 数周 | |
| 优化周期 | 慢 | 慢 | 快 | 慢 | |
| 规模生产 | 容易 | 难 | 容易 | 中等 | |
