T7 RNA聚合酶筛选 (高通量)
客户需求：交付一步纯化的突变体
| 客户要求 | 样品数量 | 交付周期 | 表达规模 | 质控检测 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 交付一步纯化的突变体 | 76个 | 22个工作日 | 50 mL | A280 | SDS-PAGE | 完整分子量 (随机挑选5个) |
76个RNA聚合酶表达数据统计
定制酶开发是生物技术和生物工程领域的一项专业服务，它专注于通过设计和改良酶，使其能够高效、有选择性地执行特定功能或催化特定反应。凯发一触即发提供卓越的综合酶开发平台，这包括了人工智能驱动的酶设计、候选酶的高通量筛选、细胞库、细胞培养工艺的优化、纯化工艺的优化、制剂开发、分析方法开发、稳定性评估以及放大生产，从而全方位地满足客户的需求。
定制酶开发在优化酶活性、稳定性和特异性方面面临着巨大挑战。在凯发一触即发，凯发一触即发充分利用凯发一触即发的酶开发平台，以改善酶的性能，使其能够满足各种应用和工艺的严格要求。凯发一触即发的策略涉及使用先进的机器学习工具结合复杂的分子、细胞和生物分析技术。这一综合方法指导着凯发一触即发对包含数千种酶变体的广泛文库进行精准的设计、全面的筛选和详尽的分析，所有这些都以高通量方式进行。每个变体都经过严格的测序，有助于识别其基因序列与功能性能之间的关联。除了酶开发，凯发一触即发还利用大肠杆菌表达系统提供可放大的生产服务。凯发一触即发在这一领域拥有丰富的经验和卓越的业绩记录，已成功交付了超过50,000批次的重组蛋白，以高效和经济的方式实现了卓越产量。
保证酶活性
批次间高度一致性
人工智能赋能酶设计
先进的生产设施
1. 候选酶筛选(高通量表达)
表达体积：4-50mL
表达产能：700个样品/周
评估蛋白表达水平和溶解度
可以在未经纯化的样品或低纯度样品中进行酶活性测试
2. 候选酶筛选(小规模表达)
表达体积：1L (烧瓶) 或5L (发酵罐)
表达产能：200个样品/周
纯化后的产量和质量数据
检测杂质是否会影响测试
小规模表达再次确认候选物
3. 细胞库构建
载体和菌株筛选，以及密码子优化
WCB 10-50代传代稳定性测试：质粒丢失率&表达水平
利用 (DLA) 技术对主细胞库和工作细胞库的噬菌体进行检测
周期性测试工作细胞库的活力和表达水平，以确定保存时间
4. 上游工艺开发
表达量：20-500L（发酵罐）
发酵工艺：高密度
细胞密度 (OD 600) > 200
5. 下游工艺开发
His标签蛋白或无标签蛋白; 纯度 (HPLC): 高至99%
内毒素水平: <1EU /mg; 产量：高至15 g/L）
6. 分析方法开发
7. 制剂开发
候选缓冲液的性能将在应力条件下进行测试，并在某些点检查纯度或活性
8. 稳定性评估
两种压力条件，一个月内检查纯度或活性4次
两个加速条件，6个月内检查纯度或活性3次
在储存条件下，24个月内检查纯度或活性9次
发货状况确认
9. 放大生产
T7 RNA聚合酶筛选 (高通量)
客户需求：交付一步纯化的突变体
| 客户要求 | 样品数量 | 交付周期 | 表达规模 | 质控检测 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 交付一步纯化的突变体 | 76个 | 22个工作日 | 50 mL | A280 | SDS-PAGE | 完整分子量 (随机挑选5个) |
76个RNA聚合酶表达数据统计
T7 RNA聚合酶筛选 (1L表达规模)
客户需求：90%纯度, 交付量5mg, 去除核酸&核酸酶
用于基因编辑的X酶
项目目的：交付该基因编辑X酶的工作细胞库
备注：选择表达量突出的克隆构建MCB和WCB
1. 表达量评估 & 限制性酶切图谱
结果：通过质粒表达水平评估和限制性检查确认MCB和WCB
2. 噬菌体检测
利用 (DLA) 技术对主细胞库和工作细胞库的噬菌体进行检测
结果：主细胞库和工作细胞库中没有噬菌体污染。
3. 质粒稳定性测试
抗生素加压WCB细胞传代培养 (P20)
结果：工作细胞库的表达水平保持稳定，P1、P5、P10、P15 和 P20 代的SDS-PAGE结果没有显著降低。
无抗生素加压WCB细胞传代培养 (P20)
结果：工作细胞库（P1、P5和P10）传代中无明显质粒丢失。
4. 长期细胞库活力测试
测试工作细胞库的活力和表达水平以确定细胞库储存时间。
| 检测项 | 存储时间检查点 (月) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 3 | 6 | 12 | 18 | 24 | |
| 细胞活力 | 通过 | 通过 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 |
| 表达水平 | 通过 | 通过 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 |
用于基因编辑的X酶
项目目的：对该基因编辑酶的细胞培养和纯化工艺进行优化
| 阶段 | 项目 | 批次 1 |
|---|---|---|
| 上游工艺开发 (细胞培养) | 细胞密度 (OD 600) | 102 |
| 湿菌重量 | 234 g/L | |
| 培养时间 | 22 h | |
| 下游工艺开发 (纯化) | 外观 | 澄清, 无色, 液体 |
| 浓度 | 12.45 mg/ml | |
| 纯度 (SDS-PAGE) | >90% | |
| 纯度 (RP-HPLC) | >95% | |
| 纯度 (SEC-HPLC) | >95% | |
| 内毒素 | 1.7 EU/mg | |
| 宿主细胞残留 (HCP) | 35.49 ng/mL | |
| 宿主DNA残留 (HCD) | 0.06 ng/mL | |
| Residual DNAse |
| |
| 支原体检测 | 阴性 | |
| 产量 | 29.2 mg/L |
用于体外诊断的X酶
项目目的：对该体外诊断酶的细胞培养和纯化工艺进行优化
| 阶段 | 项目 | 批次 1 |
|---|---|---|
| 上游工艺开发 (细胞培养) | 细胞密度 (OD 600) | 162 |
| 湿菌重量 | 250 g/L | |
| 培养时间 | 22 h | |
| 下游工艺开发 (纯化) | 外观 | 黄色粉末 |
| 浓度 | 50 mg/ml | |
| 纯度 (SDS-PAGE) | >95% | |
| 纯度 (SEC-HPLC) | >99% | |
| 水分 | 4.0 % | |
| 活性 | > 40 KU/g | |
| 产量 | > 4.5 g/L |
SDS-PAGE
SEC/RP-HPLC
E.coli 宿主DNA残留检测
qPCR assay kit
支原体DNA检测
qPCR assay kit
内毒素检测
Endotoxin LAL test
E.coli 宿主细胞残留检测
ELISA assay kit
脱氧核糖核酸酶残留检测
DNaseAlert™ QC System
核糖核酸酶残留检测
RNaseAlert™ QC System
MAD7酶活性方法
| 缓冲液1 | 缓冲液2 | |
|---|---|---|
| sgRNA1 | 82.3% | 91.3% |
| sgRNA2 | 62.6% | 87.9% |
| sgRNA3 | 84.3% | 93.3% |
| sgRNA4 | 42.7% | 66.8% |
| sgRNA5 | 68.8% | 93.0% |
| sgRNA | 酶 | 10分钟 | 60分钟 |
|---|---|---|---|
| sgRNA3(30nM) | MAD7(5 nM) | 84.3% | 90.1% |
| sgRNA3(30nM) | MAD7(15 nM) | 93.1% | 98.2% |
| sgRNA3(30nM) | MAD7(30 nM) | 97.9% | 98.4% |
MAD7存储缓冲液筛选
| 简称 | 编号 | 缓冲液组成 | 来源 |
|---|---|---|---|
| P | Buffer 1 | 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, pH 7.5, 50 % (v/v) glycerol and 1 mM TCEP | Rojek et al., 2021 |
| TA | Buffer 2 | 10 mM Tris (pH 7.4), 300 mM NaCl, 1 mM TCEP, and 50% (v/v) glycerol. | GenScript |
| TB | Buffer 3 | 10 mM Tris (pH 7.4), 300 mM NaCl, 1 mM TCEP, 0.1 mM EDTA, and 50% Glycerol | ABM |
MAD7的冻融检测
| 起始材料 | -80°C 轻度冻融 (10次) | LN2快速冻融 (10次) | |
|---|---|---|---|
| 外观 | 透明液体 | 透明液体 | 透明液体 |
| HPLC 纯度 | >99% | >99% | >99% |
| A280 浓度 (mg/ml) | 11.40 | 11.55 | 10.76 |
| SDS-PAGE 纯度 | 90% | 90% | 90% |
MAD7压力稳定性检测
| 0 天 | 5 天 | 10 天 | 30 天 | |
|---|---|---|---|---|
| 外观 (15°C) | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 纯度 (15°C) | 99% | 99% | 99% | 99% |
| 外观 (37°C) | 澄清 | 发白 | 发白 | 发白 |
| 纯度 (37°C) | 99% | 91% | 85% | 71% |
MAD7加速稳定性检测
| 0 月 | 3 月 | 6 月 | |
|---|---|---|---|
| 外观 (5°C) | 澄清 | 进行中 | 进行中 |
| 纯度 (5°C) | 99% | 进行中 | 进行中 |
| 外观 (25°C) | 澄清 | 进行中 | 进行中 |
| 纯度 (25°C) | 99% | 进行中 | 进行中 |
MAD7长期稳定性检测
| 0 月 | 1 月 | 2 月 | 3 月 | 6 月 | 9 月 | 12 月 | 18 月 | 24 月 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 外观 | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 |
| A280 浓度 (mg/ml) | 11.40 | 11.36 | 11.11 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 |
| HPLC 纯度 | >99% | >99% | >99% | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 | 进行中 |
问：定制化酶的开发和交付的常规交付周期是多久？
答：交付周期会因项目的复杂性和具体要求而有所不同，凯发一触即发将由专业技术团队进行评估以确定具体的交付时间。然而，凯发一触即发一直致力于提供高效和及时的解决方案，通常情况下，凯发一触即发能够在数月内完成并交付您所需的定制酶产品。
问：机器学习在酶开发过程中扮演什么角色？
答：凯发一触即发采用杰出的机器学习和深度学习技术来分析各类酶工程项目期间产生的大量数据集合，识别模型，并预测酶的行为。凯发一触即发可以更高效地设计具有改进性能的酶，更好的满足您的定制需求。
问：在进行酶开发项目的合作时，GenScript如何处理知识产权和保密问题？
答：凯发一触即发高度重视知识产权和保密事项。凯发一触即发的合作协议中包含了保护您的权益和确保敏感信息保密的条款。凯发一触即发一直秉承严格的道德标准，致力于在合作中维护良好的伦理行为。
问：定制酶的生产规模是多少，如何确保不同生产规模的一致性？
答：凯发一触即发可以根据您的具体需求扩大生产规模，无论是研究级别还是大型工业级别。凯发一触即发拥有严格的质量控制流程，以确保在不同规模下的酶生产一致性。
问：GenScript如何及时了解酶开发和生物技术的最新进展？
答：凯发一触即发拥有专门的研发团队，不断跟踪该领域的最新动态。此外，凯发一触即发与领先的专家和学术机构合作，以确保凯发一触即发始终站在酶开发和生物技术创新的前沿。
